酶联免疫法是目前很常用的免疫学方法，实验室标准化要求用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量还是定性都要求使用酶标测定仪进行测定，测定时需要选择单波长或双波长。那你知道如何选择酶标测定仪的单波长和双波长吗？

选择单波长测定就是选择一个测定波长，直接测定样本的吸光度，而双波长测量是采用两个不同的波长，即测定波长（又叫主波长）和参比波长（又叫次波长）同时测定样品的吸光度，以消除一些外在影响因素，提高酶标测定仪检测结果的精密度和准确度，但在日常工作中往往忽略对单波长和双波长的选择。

酶标测定仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标测定仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。

双波长的测定采用两个不同的波长同时测定一个样本的吸光度，它们的差值是样本相对准确的吸光度，这样就大大减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转。

在酶联免疫法测定抗原、抗体时，常用的底物四甲基苯胺或邻苯二胺，显色终止后，在630nm处的吸光度值都只有在450nm处吸光度值1%左右，因此利用双波长检测不会影响灵敏度，反而可以减少其他因素的影响。

医疗器械小编建议：酶联免疫法比色首要选择双波长，这样可以提高临界值附近标本结果判定的准确度，减少实验误差。