体外诊断试剂C反应蛋白实验室检测技术
加入时间:2011-12-06 10:44:26 当前新闻点击率:6355
普朗医疗器械公司资讯----临床上最早测定体外诊断试剂--CPR(C反应蛋白)的方法是基于凝集反应的原理,将患者血清与肺炎双球菌在试管中混合,通过目测的方式观察是否有凝集现象出现来定性判断。目前,检测C反应蛋白的实验室方法很多,不仅可以定性,亦可以定量。前面我们已经为大家介绍了C反应蛋白(体外诊断试剂)单扩法和胶乳凝集法,今天接着为大家介绍C反应蛋白的其他几种实验室检测技术:
一、体外诊断试剂--C反应蛋白:速率散射比浊法
速率散射比浊法是Sternberg 1977 年创建的微量免疫沉淀法,是以测定溶液对光的散射程度来判断样品中抗原的含量。一定波长的光沿水平轴照射,碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散射,散射强度与抗原抗体免疫复合物的含量成正比。
此法是一种抗原抗体结合反应的动态测定法,可快速、准确地测量样品中抗原的含量,并且可在多种自动化检测仪上测定结果。目前应用较广泛的自动化仪器是Backman - Coulter公司生产的全自动蛋白分析仪。速率散射比浊法在临床上已作为CRP常规检测手段。有研究显示:速率散射比浊法在检测时间、操作方法、结果精确度、重复性、灵敏度方面均优于单扩法。在灵敏度、准确度上与胶乳凝集法相比也具有显著性差异(P<0.05),明显高于胶乳凝集法。
二、体外诊断试剂--C反应蛋白:免疫透射比浊法
免疫透射比浊法是实验室常用检测CRP的方法,目前许多厂家也都用此法,英科新创(厦门)科技有限公司的CRP就是该法。免疫透射比浊法也是一种微量的免疫沉淀测定法。其与速率散射比浊法不同的是以测定透过溶液的光量来反映待测抗原的含量。当光线透过反应体系时,溶液中的抗原抗体免疫复合物可对光线加以吸收和反射,使透射光减少。免疫复合物越多,吸收的光线越多,透射光越少,这种变化可用吸光度表示。若抗体量固定,所测吸光度与免疫复合物的量成正比,也与待测抗原的量成正比。以一系列已知浓度的抗原标准品作对照,即可以测出受检物含量。袁斌等人曾利用全自动检测仪对两种定标方法即二点定标和多点定标法测定CRP的结果进行分析。研究表明,在回收率、重复性方面多点法优于二点法。溶血、黄疸对CRP检测的干扰不大,但多点法的干扰明显低于二点法。作者认为,原因主要是由于免疫比浊法其浊度与免疫复合物的浓度不能呈很好的线性关系。因此,不能按传统的比色方法进行测定,为确保结果可靠,建议用全自动检测仪测定CRP时,应采取多点定标方式测定。
三、体外诊断试剂--C反应蛋白:胶乳增强免疫透射比浊法
在上述的比浊法中,检测CRP的敏感性方面仍不够理想。这就需要建立更敏感、更精确、在血清CRP浓度较低的情况下仍具有较高准确度的检测CRP方法。于是人们对检测方法进行了改进和更新,创立了胶乳增强免疫透射比浊法。
胶乳增强免疫透射比浊法基本原理是首先将抗体吸附在一种胶乳颗粒上,当遇到相应的抗原时,抗原抗体结合而出现胶乳凝集。单个胶乳颗粒的大小在入射光波长之内,光线可透过。当两个以上胶乳颗粒凝集时,可阻碍光线透过,使透射光减少,其减少程度与胶乳凝集的程度成正比,亦与抗原量成正比。此方法是测定高敏C-反应蛋白(Hs-CRP)一种新型的高敏检测方法,具有快速、方便、准确等优点。胡敏等人采用胶乳增强免疫透射比浊法在全自动生化仪测定Hs-CRP方法学研究中显示,该技术测定Hs-CRP分析范围为0.125~12.5 mg/L ,最低检测线0.115 mg/L ,批内、批间精度分别为0.89%、0.90%。结果证明,胶乳增强免疫透射比浊法具有敏感性高、稳定性好、方便快速的优点,适宜于在临床推广使用。袁宝军等人曾对免疫透射比浊法(ITD)和胶乳增强免疫透射比浊法(L-EITD)检测CRP含量进行了对比实验。结果表明,两种方法检测CRP线性、精密度、稳定性较好且两种方法有较好的相关性,但L EITD抗干扰的能力更强,这一结果与De BK等的报道一致。而且L-EITD法克服ITD法的缺点,无论抗原浓度过高或过低均能与相应浓度的抗体结合,扩大了检测范围。此外,L-EITD法检测CRP在预测和预防冠心病、动脉粥样硬化等心血管疾病中起重要作用。特别是CRP含量较时,L-EITD法更适合,更能对疾病做到早期预防、早期诊断和治疗。
四、体外诊断试剂--C反应蛋白:免疫标记技术
免疫标记技术用于CRP测定的免疫标记方法有放射免疫法、酶免疫法、金标免疫法等。由于放射免疫法存在放射性同位素半衰期短,放射性污染不易保存,稳定性差等缺点,使用中有诸多不便,尤其是酶免疫法的广泛应用,使该方法现在临床上已很少采用。目前,临床应用较多方法是以酶联免疫吸附试验(ELISA)为主的酶免疫标记技术。该方法是将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来,根据酶作用底物后颜色变化,通过酶标仪对检测样品进行定量测定和分析,并用标准曲线对照计算出CRP含量。ELISA法具有高度的敏感性、特异性,而且它的试剂比较稳定,无放射性污染。尤其是商品试剂盒和自动化酶标仪的应用,使其成为适用于各级检验部门的检测手段。同时,也是测定患者血清Hs-CRP常用的方法之一。有研究报道,在血管粥样硬化进展期中,炎症反应起了重要作用,且属于低度慢性炎症状态,Hs-CRP的检测为低度慢性炎症的发现提供了重要的研究手段。
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