普朗医疗器械公司1月20讯 利用尿液分析仪检测尿液中形成分检查是作为完整尿液分析不可缺少的重要组成部分，同时这种检测对泌尿系统等疾病的诊断、定位、鉴别、预后判断、药物治疗监测及健康人员筛查等有重要意义。

        在尿液形成过程中，由于泌尿道组织的脱落物及细胞渗出通过尿离体后自行沉降或通过离心技术。后者的敏感性和阳性率较未离心沉降法高15～20倍，因此是目前尿沉渣镜检标准化的基础。用离心法检查尿沉渣的操作要求必须标准化，如离心机内温度应保持15C～25C，离心条件如相对离心力（RCF）400G离心5 min等，使用普通亮视野光学显微镜，镜头（目镜、物镜）应固定，低倍高倍看1520个视野。采用干涉、相差、偏光荧光、扫描和透视电镜等多种显微镜检查，显著地提高了对各种尿有形成分中“颗粒”的识别和检出。采用高质量光学玻璃制成的尿沉渣分析板，可保证每份尿标本在同等体积、相同厚薄区域内的分析结果，配合自动混匀、自动吸引、自动稀释、自动清洗等功能，以达到保证尿沉渣检查结果精密和准确。近年来Kouri提出尿颗粒分析的概念：即尿中的 各种细胞、管型、结晶、精子、细菌（霉菌）均属颗粒，如能采用不稀释的新鲜尿，用自动化仪器识别及定量是改变传统离心手工操作，满足病人、健康人尿检查需要的前沿性的实验方法改革。由于传统的尿沉渣在普通亮视野的玻片上对湿片直接观察受涂片厚薄、观察有效分布区、显微镜放大倍数、光亮调节等多种因素以及检查者的经验水平等多因素影响镜检结果造成对尿有形成分检出的差异与不可比性，Haber提出如在尿中查不出有病理意义的成分，镜检就缺乏临床价值；要进行认真、细微有对比性的检查就应强调染色后细微检查的重要性。

1 尿有形成分染色的作用

1.1 防止漏检   如透明管型在强的光线下易漏检，即使采用调节聚光镜减弱光线，对缺乏经验的实验人员也极易漏检。
 1.2 防止误检   如将粘液丝或棉、毛等纤维误认为管型，将酵母菌、草酸钙误认为是红细胞、将肾小管上皮细胞误认为是白细胞等。
 1.3 防止因长期镜检造成的疲劳、工作效率下降   染色后，可在短期内清楚地观察有形成分的细微结构，有助于识别肿瘤细胞和肾移植排斥反应。
 1.4 为长期保存尿中典型的病理成分，为提供教学、科研的图谱创造条件。   尽管通过对尿有形成分染色有防止漏检，提高对病理成分鉴别力等优点，但我们也应充分认识到尿中有形成分存在 着多样性、复杂性及易变性等问题；即使是用于化学试带联合普通亮视野显微镜联合检查也存在一定的局限性，有待进一步改革提高。

2 尿有形成分染色方法及其选择

    国内外有的作者不提倡沉渣染色检查。或提出将染色作为特殊检查与“常规”沉渣检查分列；染色方法少则2种，多的可达10多种。为便于叙述，现将染色法归纳为单染、复合染色、活体染色、鉴别染色及特殊染色等五种。

2.1 单染法  即单一染色液染尿中有形成分的方法，如在湿的尿沉渣片（简称湿片）中加入2%醋酸1滴可破坏红细胞，鉴别酵母菌孢子外，还可清楚见到白细胞核。湿片中加一滴Lugor碘液，上皮细胞染淡黄而白细胞深染，管型也着色。以蓝色染料有0.5%～ 1%亚甲蓝、2%考马斯亮蓝、品蓝等，我们感到蓝染料单一而后者细胞不易着色，但粘液丝蓝色可辨。欧洲尿液检查文件推荐应用0.5%甲苯胺蓝认为有对胞核结构染色清晰的优点，崔建和用2%孔雀绿观察了36例小儿急性肾炎发现红细胞管型清晰。其他的单染值得注意的是胆汁，因在严重肝病黄疸尿中，尿中各种染色结构分明易于识别，因而没想用天然的胆汁染“湿片”是否可取？

    以上列举的几种单染法有试剂单纯、易得、低廉且易于配制，染色简便、易于推广等优点，但缺点为染色单一，对核、胞质不易鉴别，分色及渗透性差，高浓度染料放置后形成沉渣，因此最好用小包装，分装染色前滤过残渣以免干扰染色视野。

2.2 复合染色   用两种或两种以上染色法或加助染剂的染色法。最常用的尿沉渣在玻片干燥后（简称干片）使用瑞-吉氏联合染色，由于与血片染色同步，各实验室易于实施及推广。北医大一院1987年用本法计数尿沉渣中性粒细胞的百分比以70%为界区别感染及非感染。但干片需时长，干燥片时细胞易变性及形态变化，与湿片比较细胞、管型易溶解和变形；在有形成分少的干片上如不加血清固定，则易因冲洗不易看到其中有形成分。瑞氏染色还受pH值、温度等因素影响，不易看清肾小管上皮细胞结构。据多种文献介绍，认为巴氏（Papanicolaou）染色为最佳复合染色法，不仅分色良好，有形成分结构清晰，且对尿中异形细胞如肿瘤细胞易于分辨；Schumann在肾细胞病理染色为首选方法，但因染料品质要求高，采用多种染料、多次脱水手续繁杂，因而很难普及。

2.3 活体染色法   简便易行的有1%灿烂甲酚蓝（煌焦油蓝）易在各单位实施，但也具备上述单染法的问题。Sternheimen-Malbin(S-M)即龙胆紫-沙黄染色染料价廉易得，染色方便，已成为国内外介绍最多的染色方法。早在60年代的专著中对染料配制染色方法已有详细介绍，通过S-M染色红细胞可染成淡蓝色，多形核白细胞染成橙红色，在有的白细胞胞质中见颗粒呈Brown分子运动定名为闪光细胞。据报道如在白细胞中＞10%，对确定肾盂肾炎有助。透明管型呈粉红或淡紫色细胞管型染成深紫色，但本法试剂配制后易产生沉渣，且对尿有形成分鉴别作用不够强，因而欧洲文件建议用Alicianblue 8G-Pyronin B组合即Sternbeimer(S)染色法取代，国内也有SM染色及S染色法染色结果对比表的介绍。其他复合染色如Kage 染色法，采用醋酸酮、8-羟喹啉联苯胺组合鉴别白细胞，但后者为致癌物，不再推荐。还有Lippman染色法用饱和苦味酸、甘油、美蓝、伊红等染料，但染料组合后易产生紫褐色细颗粒干扰染色。

2.4 鉴别染色   按不同染色法以鉴别尿中不同成分，如用油红-O或苏丹-Ⅲ染脂肪，Hansel染色染嗜酸粒细胞脂酶，Naphy-ASD染色查单核细胞，Gram染色法染细菌，普鲁士蓝染含铁血黄素等，这些染色在国外已列入规程要求达到规范化、程序化及标准化，在尿有形成分染色中发挥鉴别作用，因此在国内建议借鉴应用在实验检查中有利于对尿颗粒的识别。

2.5 特殊染色法   为近年来在自动尿有形成分检查推广的染色法，土在自动尿有形成分细胞仪（UF-100、UF-50）应用的快速的尿颗粒成分检查。UF系列将染料Uninosearch即含2种类型的荧光染料：羰化青及菲啶使尿颗粒着色后，经激光照射，检测着色颗粒前向散射光和不同荧光强度，提供尿中颗粒大小及染色敏感性的信息。本法有不需离心，方法统一可比性高，易进行质量管理可同时完成红细胞、白细胞、细菌（酵母菌）等多项检测，因而是尿分析的重大改革。采用荧光染料在荧光显微镜下观察肿瘤细胞，用扫描、透射电镜观察细菌管型。另外采用免疫组化染色识别管型来源，便于对急性肾小管坏死，急性间质性肾炎，新月型肾炎特殊肾疾病提供了无需活检的鉴别实验，本法实验需针对肾细胞、管型的各种单克隆抗体，实验难度大，因而报道不多。

    Grupp C等报道在丙酮固定后鉴别非鳞状上皮核的凝集素染色法即通过免疫荧光检查提供了一种鉴别尿中有核细胞的可靠方法，Grunewald-R-W等观察了41例肾移植排斥反应病人，用流式细胞仪观察尿中淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD14及单核巨噬细胞，提供了一个对急性肾排斥反应有参考价值的尿有形成分染色法。
    
     尿有形成分虽有一定进展，我们初步介绍了各种鉴别尿中颗粒的染色法，特别是自动分析仪--流式细胞仪，半自动定量分析板等均采用染色技术提高鉴别力证明了染色的重要性。通过上述方法介绍及选择原则，各种染色法各有特点。在基层实验室应用复合染色或活性染色比单染效果好，肾科用免疫荧光提高识别力，而鉴别染色有助于对尿中 不同颗粒的识别。如何进一步完善染色法对染液进行质量管理，并对染色方法规范化、标准化，是今后值得深入探讨的。还有一个重要的问题是如何将尿有形成分染色法用于肾、泌尿道及其他疾病病人的防治工作，加强临床及实验室的联系，为临床服务，也是实验室工作人员应经常考虑到的。